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    普朗醫(yī)療器械廠家資訊 目前來說，血清學診斷技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用十分廣泛，尤其是針對結(jié)核病的診斷為其提供了一個非常高效的手段。

    血清學診斷技術(shù)的發(fā)展

    在結(jié)核病血清學診斷過程中發(fā)現(xiàn)單一抗原無法產(chǎn)生令人滿意的診斷結(jié)果，多克隆抗原“雞尾酒”的應(yīng)用，通過體外診斷試劑研究這有助于血清學診斷特異性和敏感性的提高。 ELISA方法簡便易行，快速又無需特殊精密儀器，在結(jié)核病血清學診斷方面研究最多，應(yīng)用最廣并在技術(shù)上進行了多方面的改進。另外，免疫印跡技術(shù)、蛋白芯片技術(shù)等檢測血清抗體方法，為結(jié)核病的診斷提供了有價值的手段。

    1.聯(lián)合應(yīng)用結(jié)核抗原 將結(jié)核特異性的抗原聯(lián)合或者幾種特異蛋白融合成多聚蛋白復合物用于檢測能提高診斷能力，不影響診斷特異性，而比單一抗原法具有更高的敏感性。Okuda等回顧性地分析了三種結(jié)核病血清學診斷抗原TBGL、LAM、A60在活動性肺結(jié)核中的應(yīng)用，其敏感性分別為70.1%、67.5%、70.9%，特異性分別為92.5%、97.5%、95.0%。三種抗原聯(lián)合檢測其敏感性提高到91.5%，特異性降為87.5%。Houghton等報道用病人的血清從結(jié)核分枝桿菌基因組表達文庫中鑒定出Mtbll(即CFP-10)、Mtb8、Mtb48和DPEP(富含脯氨酸的蛋白)，并得到各自的重組蛋白。將 Mtbl1、Mtb8與38kDa蛋白的編碼基因重組構(gòu)建經(jīng)大腸埃希菌表達為多表位的蛋白聚合體TbF10，在此基礎(chǔ)上，又加入Mtb48構(gòu)建成蛋白聚合體TbF6，兩者用于診斷，比單一抗原法的靈敏度都有所提高，再加入DPEP則能顯著提高檢測的靈敏度。多抗原“雞尾酒”診斷方法有利于節(jié)約生產(chǎn)和檢測成本，如進一步優(yōu)化抗原組合，可以在發(fā)展中國家推廣使用。

    2.循環(huán)免疫復合物(CIC)測定 特異性循環(huán)免疫復合物的檢測是結(jié)核病血清學診斷中的另一重要領(lǐng)域?；顒有越Y(jié)核病人特異性IgG類免疫復合物明顯增加，并隨病情的好轉(zhuǎn)而下降，故檢測血清、腦脊液、胸腹水中的結(jié)核特異性免疫復合物對活動性結(jié)核的診斷也有重要的意義。部分活動性肺結(jié)核病人痰菌檢查陽性，而血清結(jié)核抗體測定為陰性，其原因之一就是形成CIC所致。因此，眾多的研究者認為檢測結(jié)核病人CIC含量有助于結(jié)核病的輔助診斷。檢測CIC最簡便的方法為酶標法。CIC-ELISA特異性比痰涂片要高，尤其對不易得到痰標本的兒童結(jié)核和肺外結(jié)核效果較好。

    3.免疫印跡技術(shù) 免疫印跡技術(shù)是高分辨的SDS-PAGE技術(shù)與高敏感性的酶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)的結(jié)合產(chǎn)物。目前，該技術(shù)已被轉(zhuǎn)化成產(chǎn)品，操作者只要通過后半步驟的酶聯(lián)免疫反應(yīng)，即可檢出待檢標本中所含的多種結(jié)核分枝桿菌多肽抗原成分的特異性抗體。北京生產(chǎn)的TB-40結(jié)核抗體免疫印跡法檢測試劑盒選取的抗原來自于結(jié)核分枝桿菌全菌，并篩選出最具免疫原性及特異性高的蛋白成份做為診斷抗原，大幅度提高了診斷準確性，并可做為結(jié)核病診斷的確證實驗。用于檢測痰菌陽性結(jié)核患者、痰菌陰性結(jié)核患者、肺外結(jié)核病的敏感性分別為93%、86%、89%，特異性超過95%。

    4.酶聯(lián)免疫斑點(ELISpot)技術(shù) ELISpot技術(shù)是檢測細胞分泌細胞因子的一種實驗方法，采用可定量的夾心ELISA方法，通過酶標儀對ELISpot酶聯(lián)斑點分析系統(tǒng)對加底物后形成的斑點分析后得出結(jié)果。ELISpot具有較高的特異性和敏感性，目前正被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用。英國Ewer等用ELISpot檢測對結(jié)核分枝桿菌分泌的抗原有特異性反應(yīng)的T淋巴細胞來診斷早期結(jié)核病。這項研究共納入了結(jié)核流行區(qū)有不同程度結(jié)核病接觸史的535名學生，結(jié)果顯示結(jié)核菌素皮膚試驗(TST)和 ELISpot的一致性達89%(P<0.0001)。但ELISpot與研究對象結(jié)核病接觸程度之間的正相關(guān)性顯著強于TST。在接種過BCG的兒童中，TST假陽性的可能性較大，而BCG接種對ELISpot結(jié)果沒有影響。作者認為ELISpot可開始替代TST，這將使更多的人能在感染仍處于隱匿期時就可進行預(yù)防，而不至于發(fā)展成為嚴重的結(jié)核病。
5.蛋白芯片技術(shù) 蛋白芯片技術(shù)借助于高通量蛋白檢測技術(shù)平臺，將結(jié)核分枝桿菌多種抗原固相于同一微孔濾膜并利用微孔濾膜的滲濾、濃縮、凝集作用，使抗原抗體反應(yīng)在固相膜上快速進行，然后以免疫金作為標記物直接在膜上顯色。再以蛋白芯片閱讀儀自動掃描膜上顏色，建立多種結(jié)核抗原的蛋白芯片檢測系統(tǒng)。該檢測系統(tǒng)具有以下優(yōu)點: 操作簡便、快速，病人血清分離出來后，只需5分鐘就可以為臨床提供有價值的實驗資料；敏感性高，特異性強，符合臨床輔助診斷要求；結(jié)果的判斷采用芯片識別閱讀儀，避免了人為判讀時的主觀誤差。

    6.體液中結(jié)核抗原或抗體的檢測 結(jié)核抗體檢測技術(shù)已日趨成熟，測定的標本除血清外還有腦脊液、胸腹水、痰、灌洗液和尿液等。Singh等聯(lián)合檢測尿液和血清中抗體診斷結(jié)核病有很高的靈敏度，為進一步研究檢測尿液中的抗體診斷結(jié)核病打下了基礎(chǔ)。由于機體受到結(jié)核分枝桿菌感染后，體內(nèi)首先出現(xiàn)的是結(jié)核抗原，而結(jié)核抗體則要感染后8周起逐漸產(chǎn)生，因此檢測結(jié)核抗原具有早期診斷價值。尤其對結(jié)核性腦膜炎的快速診斷、對器官移植術(shù)后并發(fā)結(jié)核感染的確定和對肺結(jié)核與肺癌的鑒別診斷等尤為重要。目前，有關(guān)結(jié)核抗原檢測的研究國內(nèi)外均有報道，其中尤以腦脊液結(jié)核抗原檢測的研究較多。Song等用抗結(jié)核分枝桿菌過氧化氫酶-過氧化物酶（mKatG）單克隆抗體，采用蛋白印跡技術(shù)來檢測病人組織中的mKatG抗原，其敏感性為55%，特異性為100%。痰標本中的結(jié)核抗原檢測也有報道，但技術(shù)問題較多，因為痰是不均勻的粘膠樣半流性液體，很難準確測定。

    展望

    現(xiàn)有結(jié)核病的診斷方法并未能滿足臨床需要，未來結(jié)核病診斷試劑的發(fā)展更加強調(diào)簡單、價廉、快速、敏感而且特異，且對特定的人群要有特定的檢測診斷方法。目前我們應(yīng)加強下述內(nèi)容的研究：①發(fā)現(xiàn)更多的特異性抗原聯(lián)合用于檢測：由于結(jié)核分枝桿菌抗原結(jié)構(gòu)復雜，分枝桿菌屬中各種細菌之間抗原性存在廣泛的交叉，因此應(yīng)結(jié)合分枝桿菌基因組學和比較基因組學的成果，著重于結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的分析和純化；②加強測定方法的研究，進一步提高檢測方法的敏感性和特異性：要對方法的最佳測定條件、可能的影響因素等進行細致研究；要通過大量標本的測定結(jié)果比較，選擇最佳測定方法，并使之在基層推廣應(yīng)用；要研究定量測定，盡可能用儀器判斷結(jié)果，以避免人為測定誤差；③加強對特定的人群如痰涂片陰性病人、合并HIV感染者、老年患者或隱性感染者、肺外結(jié)核病和兒童結(jié)核病等特定的檢測診斷方法的研究；④加強對除痰外的多種體液檢測的研究，如尿液，容易收集且無創(chuàng)，特異，是未來結(jié)核病血清學診斷的方向。

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