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    普朗醫(yī)療器械廠家檢驗(yàn)科學(xué) 結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)檢查目前是結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。由于痰涂片陽(yáng)性率較低，鏡檢需要經(jīng)驗(yàn)，難以區(qū)分環(huán)境分枝桿菌造成的假陽(yáng)性；痰培養(yǎng)需時(shí)太長(zhǎng)，因此通過(guò)體外診斷試劑檢查細(xì)菌對(duì)結(jié)核病的診斷價(jià)值有限。

    隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，用高度敏感的方法檢測(cè)結(jié)核菌及其特異性DNA片段，如PCR、生物探針和基因芯片等，需要相應(yīng)的檢測(cè)設(shè)備和檢測(cè)費(fèi)用高未能廣泛推廣。血清學(xué)診斷技術(shù)有其固有的優(yōu)勢(shì)，如操作簡(jiǎn)便、快速、便于推廣、無(wú)需特殊精密儀器，已有多種純化的特異性抗原可采用，可以發(fā)展成自動(dòng)化檢測(cè)，尤其是對(duì)痰培養(yǎng)陰性和肺外結(jié)核病有較為重要的輔助診斷價(jià)值，受到廣泛的重視。本文從靶抗原的選擇和檢測(cè)技術(shù)的改進(jìn)等方面綜述了結(jié)核病血清學(xué)診斷的現(xiàn)狀和進(jìn)展。

    抗原的選擇

    特異性的抗原是提高血清血液分析儀檢測(cè)敏感性、特異性的重要環(huán)節(jié)。應(yīng)用于血清學(xué)診斷的理想抗原應(yīng)具有種的特異性及強(qiáng)的免疫原性。尤其是結(jié)核分枝桿菌全基因組序列測(cè)定以后，單克隆抗體、分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和比較基因組學(xué)等技術(shù)的應(yīng)用，已獲得多種純化和特異性的診斷抗原?，F(xiàn)將當(dāng)前最受關(guān)注的抗原及其臨床評(píng)估結(jié)果歸納如下：

    1.脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗原 脂阿拉伯甘露聚糖是分枝桿菌細(xì)胞壁的重要組成部分，是屬特異性抗原，具有較強(qiáng)的免疫原性和免疫調(diào)節(jié)功能，可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，因而是結(jié)核病的血清學(xué)診斷應(yīng)用較廣的抗原。有關(guān)LAM抗原的應(yīng)用報(bào)道很多, Antunes等用美國(guó)生產(chǎn)的結(jié)明(MycoDot TM)試劑盒檢測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核病人的敏感性為63.0%，特異性為92.4%，認(rèn)為檢測(cè)LAM抗體是結(jié)核病一項(xiàng)有效的輔助診斷方法。

    2.A60(antigen 60) A60是從牛分枝桿菌胞漿中提取的一種大分子物質(zhì)，是脂質(zhì)蛋白和多糖的復(fù)合抗原。Wu等用ELISA法檢測(cè)了178例活動(dòng)性肺結(jié)核患者和151例其他疾病患者血清中的IgG A60，根據(jù)受試者工作特性曲線(ROC)取261.2單位為截切值(cutoff point)，其敏感性和特異性分別為49.4%和79.5%，認(rèn)為胸部X片異常的患者結(jié)合IgG A60陽(yáng)性將有助于肺結(jié)核病的準(zhǔn)確臨床診斷。

    3.結(jié)核菌糖脂(TBGL)抗原 結(jié)核菌糖脂抗原是分枝桿菌細(xì)胞壁上的糖脂類(lèi)物質(zhì)，具有菌屬特異性。近年來(lái)的研究表明，糖脂類(lèi)抗原在診斷方面有很大的優(yōu)勢(shì)。Maekura等建立了糖脂類(lèi)抗原抗體快速檢測(cè)方法，并做了臨床評(píng)價(jià)，對(duì)痰涂片陰性的活動(dòng)性肺結(jié)核的靈敏度為56.8％，對(duì)痰培養(yǎng)陰性的活動(dòng)性肺結(jié)核的靈敏度為51.2％。將TBGL與核酸擴(kuò)增方法(NAA)聯(lián)合用于檢測(cè)，檢出率比兩者單獨(dú)使用時(shí)進(jìn)一步提高。Tiwari等用脂質(zhì)體顆粒作為載體，利用純化的TBGL抗原特異的與結(jié)核病患者血清中的TBGL抗體結(jié)合，形成藍(lán)色凝集顆粒來(lái)診斷活動(dòng)性結(jié)核病，其敏感性、特異性分別達(dá)94%和98.3%。該方法快速(4min)、經(jīng)濟(jì)，且可以區(qū)別活動(dòng)性肺結(jié)核、卡介苗(BCG)免疫接種者與健康人群，可用于人群大規(guī)模篩選肺結(jié)核病人。

    4.38kDa蛋白 38kDa蛋白是一定位在質(zhì)膜上的磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，只在分枝桿菌復(fù)合體中表達(dá)，BCG合成38kDa蛋白的量?jī)H為結(jié)核分枝桿菌的十分之一。
38kDa 蛋白為一分泌蛋白，可刺激T細(xì)胞和B細(xì)胞免疫反應(yīng)，廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的血清學(xué)試驗(yàn)。英國(guó)公司生產(chǎn)的OMEGA結(jié)核抗體定量檢測(cè)Myco G、A、M試劑盒聯(lián)合應(yīng)用38kDa和脂多糖(LPS)抗原，而TB Complex Plus試劑盒選用的是38kDa和16kDa抗原。Butt等對(duì)OMEGA試劑盒進(jìn)行了評(píng)價(jià)，認(rèn)為具有種特異性的TB Complex Plus和有屬特異性的Myco M聯(lián)合應(yīng)用可取得最好的效果，檢測(cè)肺結(jié)核的敏感性和特異性分別為87%和93%。38kDa對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的診斷非常有效，但和大腸埃希菌同源蛋白有 30%以上的交叉，所以對(duì)不同人群的靈敏度波動(dòng)較大，尤其對(duì)涂片陰性和合并HIV感染的結(jié)核病患者效果較差。

    5.Ag85 抗原85復(fù)合體(Ag85)是一組具有較強(qiáng)細(xì)胞免疫及體液免疫活性的分枝桿菌分泌性蛋白，分子量約為30～32kDa。分枝桿菌各菌株均可分泌Ag85。結(jié)核分枝桿菌Ag85中至少包括三種蛋白成分—Ag85A、Ag85B和Ag85C，其中有免疫作用的主要為Ag85A和Ag85B。Ag85具有分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶的活性，在分枝桿菌細(xì)胞壁合成的最后階段發(fā)揮必要的作用。它還能和人纖連蛋白(FN)相結(jié)合，有助于結(jié)核菌入侵宿主細(xì)胞。Ag85可能發(fā)展成為結(jié)核病的血清學(xué)診斷抗原?；顒?dòng)性結(jié)核病人血清中的Ag85抗體平均水平比其他分枝桿菌疾病患者和健康對(duì)照者高50～150倍，可通過(guò)檢測(cè)血循環(huán)中Ag85抗體，對(duì)活動(dòng)性結(jié)核加以診斷。Kashyap等用間接ELISA法檢測(cè)89%疑似結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中存在Ag85抗體，認(rèn)為檢測(cè)Ag85抗體為結(jié)核性腦膜炎的早期和確定性診斷提供了一個(gè)更靈敏的選擇。

    6.ESAT-6和CFP10 ESAT-6即6kDa早期分泌性抗原靶，是從結(jié)核分枝桿菌短期培養(yǎng)濾液中分離純化出的一種低分子量分泌性蛋白，具有較強(qiáng)的細(xì)胞免疫活性，在抗結(jié)核感染的免疫回憶應(yīng)答中起重要作用。ESAT-6僅存在于致病性分枝桿菌中，包括人型結(jié)核桿菌、牛型結(jié)核桿菌、非洲分枝桿菌以及蘇爾加分枝桿菌、海水分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌等非典型分枝桿菌，而B(niǎo)CG及其他非致病性分枝桿菌缺失。CFP-10即培養(yǎng)濾液蛋白10，與ESAT-6位于同一基因簇上，兩者分布相同，都是RDl區(qū)編碼的。ESAT-6和CFP10能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性IgG，利用ESAT-6和CFP10蛋白抗原能與結(jié)核分枝桿菌感染者血中特異性 IgG結(jié)合的特點(diǎn)，采用ELISA等方法可特異性區(qū)分是真正的結(jié)核分枝桿菌感染或是接種BCG后所致敏，該方法明顯優(yōu)于PPD作包被抗原的ELISA法。陳全等以CFP10-ESAT-6融合蛋白為抗原，用ELISA法檢測(cè)豚鼠血清中抗結(jié)核分枝桿菌抗體，11份H37Rv感染豚鼠血清全部呈陽(yáng)性反應(yīng)，11 份BCG免疫豚鼠血清僅1份呈陽(yáng)性反應(yīng)。

    7.U1蛋白 Mukherjee等收集結(jié)核分枝桿菌H37Rv株靜脈感染C57BL/6小鼠早期(10～14d) 尿液分離到一種結(jié)核抗原，氨基酸測(cè)序鑒定后，克隆并表達(dá)相應(yīng)的基因，純化得到可溶的重組蛋白命名為U1蛋白(Urine Protein 1)，分子量大約為16.8kDa。進(jìn)一步用ELISA法檢測(cè)肺結(jié)核病人血清中U1抗體的敏感性為60%，檢測(cè)合并HIV感染的結(jié)核病患者其敏感性為 87%，而正常人血清不與U1蛋白反應(yīng)。將U1蛋白與Mtb81聯(lián)合用于檢測(cè)合并HIV感染的結(jié)核病患者的敏感性為93.6%。同時(shí)檢測(cè)了12名HIV感染的非結(jié)核病人，其中9名患者血清中無(wú)可檢測(cè)的U1抗體，另外3名U1抗體的水平處于ELISA法檢測(cè)的臨界點(diǎn)。因此認(rèn)為，檢測(cè)U1抗體可增加結(jié)核病血清學(xué)診斷的敏感性，尤其對(duì)合并HIV感染的結(jié)核病患者。

    8.其它抗原 Weldingh等在大腸埃希菌中克隆表達(dá)了4種超抗原—TB9.7、TB15.3、TB16.3和TB51，并用它們來(lái)檢測(cè)痰涂片陽(yáng)性和涂片陰性的結(jié)核病人，靈敏度為36%～93%，而特異性超過(guò)97%，其中TB16.3最為有效，TB16.3與TB9.7聯(lián)合檢測(cè)合并HIV感染的結(jié)核病患者其敏感性超過(guò)85%。Bahk等基因重組表達(dá)Rv3369和Rv3874兩個(gè)基因，并用它們做抗原檢測(cè)結(jié)核病患者的敏感性分別為60%、74%, 特異性分別為96%、97%，表明是有價(jià)值的結(jié)核病血清學(xué)診斷抗原。其它抗原，如MPT64、P90、TB4等，也曾被做為快速血清學(xué)檢測(cè)的侯選抗原加以研究，但大都未達(dá)到診斷靈敏度的要求。

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