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普朗醫(yī)療器械公司資訊----臨床上最早測(cè)定體外診斷試劑--CPR（C反應(yīng)蛋白）的方法是基于凝集反應(yīng)的原理，將患者血清與肺炎雙球菌在試管中混合，通過(guò)目測(cè)的方式觀察是否有凝集現(xiàn)象出現(xiàn)來(lái)定性判斷。目前，檢測(cè)C反應(yīng)蛋白的實(shí)驗(yàn)室方法很多，不僅可以定性，亦可以定量。前面我們已經(jīng)為大家介紹了C反應(yīng)蛋白（體外診斷試劑）單擴(kuò)法和膠乳凝集法，今天接著為大家介紹C反應(yīng)蛋白的其他幾種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)：

一、體外診斷試劑--C反應(yīng)蛋白：速率散射比濁法　
速率散射比濁法是Sternberg 1977 年創(chuàng)建的微量免疫沉淀法，是以測(cè)定溶液對(duì)光的散射程度來(lái)判斷樣品中抗原的含量。一定波長(zhǎng)的光沿水平軸照射，碰到小顆粒的免疫復(fù)合物可導(dǎo)致光散射，散射強(qiáng)度與抗原抗體免疫復(fù)合物的含量成正比。
此法是一種抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)態(tài)測(cè)定法，可快速、準(zhǔn)確地測(cè)量樣品中抗原的含量，并且可在多種自動(dòng)化檢測(cè)儀上測(cè)定結(jié)果。目前應(yīng)用較廣泛的自動(dòng)化儀器是Backman - Coulter公司生產(chǎn)的全自動(dòng)蛋白分析儀。速率散射比濁法在臨床上已作為CRP常規(guī)檢測(cè)手段。有研究顯示:速率散射比濁法在檢測(cè)時(shí)間、操作方法、結(jié)果精確度、重復(fù)性、靈敏度方面均優(yōu)于單擴(kuò)法。在靈敏度、準(zhǔn)確度上與膠乳凝集法相比也具有顯著性差異（P<0.05），明顯高于膠乳凝集法。

二、體外診斷試劑--C反應(yīng)蛋白：免疫透射比濁法　
免疫透射比濁法是實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)CRP的方法，目前許多廠家也都用此法，英科新創(chuàng)（廈門(mén)）科技有限公司的CRP就是該法。免疫透射比濁法也是一種微量的免疫沉淀測(cè)定法。其與速率散射比濁法不同的是以測(cè)定透過(guò)溶液的光量來(lái)反映待測(cè)抗原的含量。當(dāng)光線透過(guò)反應(yīng)體系時(shí)，溶液中的抗原抗體免疫復(fù)合物可對(duì)光線加以吸收和反射，使透射光減少。免疫復(fù)合物越多，吸收的光線越多，透射光越少，這種變化可用吸光度表示。若抗體量固定，所測(cè)吸光度與免疫復(fù)合物的量成正比，也與待測(cè)抗原的量成正比。以一系列已知濃度的抗原標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，即可以測(cè)出受檢物含量。袁斌等人曾利用全自動(dòng)檢測(cè)儀對(duì)兩種定標(biāo)方法即二點(diǎn)定標(biāo)和多點(diǎn)定標(biāo)法測(cè)定CRP的結(jié)果進(jìn)行分析。研究表明，在回收率、重復(fù)性方面多點(diǎn)法優(yōu)于二點(diǎn)法。溶血、黃疸對(duì)CRP檢測(cè)的干擾不大，但多點(diǎn)法的干擾明顯低于二點(diǎn)法。作者認(rèn)為，原因主要是由于免疫比濁法其濁度與免疫復(fù)合物的濃度不能呈很好的線性關(guān)系。因此，不能按傳統(tǒng)的比色方法進(jìn)行測(cè)定，為確保結(jié)果可靠，建議用全自動(dòng)檢測(cè)儀測(cè)定CRP時(shí)，應(yīng)采取多點(diǎn)定標(biāo)方式測(cè)定。
 

三、體外診斷試劑--C反應(yīng)蛋白：膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法　
在上述的比濁法中，檢測(cè)CRP的敏感性方面仍不夠理想。這就需要建立更敏感、更精確、在血清CRP濃度較低的情況下仍具有較高準(zhǔn)確度的檢測(cè)CRP方法。于是人們對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行了改進(jìn)和更新，創(chuàng)立了膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法。
膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法基本原理是首先將抗體吸附在一種膠乳顆粒上，當(dāng)遇到相應(yīng)的抗原時(shí)，抗原抗體結(jié)合而出現(xiàn)膠乳凝集。單個(gè)膠乳顆粒的大小在入射光波長(zhǎng)之內(nèi)，光線可透過(guò)。當(dāng)兩個(gè)以上膠乳顆粒凝集時(shí)，可阻礙光線透過(guò)，使透射光減少，其減少程度與膠乳凝集的程度成正比，亦與抗原量成正比。此方法是測(cè)定高敏C-反應(yīng)蛋白（Hs-CRP）一種新型的高敏檢測(cè)方法，具有快速、方便、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。胡敏等人采用膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法在全自動(dòng)生化儀測(cè)定Hs-CRP方法學(xué)研究中顯示，該技術(shù)測(cè)定Hs-CRP分析范圍為0.125～12.5 mg/L ，最低檢測(cè)線0.115 mg/L ，批內(nèi)、批間精度分別為0.89%、0.90%。結(jié)果證明，膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法具有敏感性高、穩(wěn)定性好、方便快速的優(yōu)點(diǎn)，適宜于在臨床推廣使用。袁寶軍等人曾對(duì)免疫透射比濁法（ITD）和膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法（L-EITD）檢測(cè)CRP含量進(jìn)行了對(duì)比實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，兩種方法檢測(cè)CRP線性、精密度、穩(wěn)定性較好且兩種方法有較好的相關(guān)性，但L EITD抗干擾的能力更強(qiáng)，這一結(jié)果與De BK等的報(bào)道一致。而且L-EITD法克服ITD法的缺點(diǎn)，無(wú)論抗原濃度過(guò)高或過(guò)低均能與相應(yīng)濃度的抗體結(jié)合，擴(kuò)大了檢測(cè)范圍。此外，L-EITD法檢測(cè)CRP在預(yù)測(cè)和預(yù)防冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病中起重要作用。特別是CRP含量較時(shí)，L-EITD法更適合，更能對(duì)疾病做到早期預(yù)防、早期診斷和治療。
 

四、體外診斷試劑--C反應(yīng)蛋白：免疫標(biāo)記技術(shù)
免疫標(biāo)記技術(shù)用于CRP測(cè)定的免疫標(biāo)記方法有放射免疫法、酶免疫法、金標(biāo)免疫法等。由于放射免疫法存在放射性同位素半衰期短，放射性污染不易保存，穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，使用中有諸多不便，尤其是酶免疫法的廣泛應(yīng)用，使該方法現(xiàn)在臨床上已很少采用。目前，臨床應(yīng)用較多方法是以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）為主的酶免疫標(biāo)記技術(shù)。該方法是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶對(duì)底物高效催化作用結(jié)合起來(lái)，根據(jù)酶作用底物后顏色變化，通過(guò)酶標(biāo)儀對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行定量測(cè)定和分析，并用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照計(jì)算出CRP含量。ELISA法具有高度的敏感性、特異性，而且它的試劑比較穩(wěn)定，無(wú)放射性污染。尤其是商品試劑盒和自動(dòng)化酶標(biāo)儀的應(yīng)用，使其成為適用于各級(jí)檢驗(yàn)部門(mén)的檢測(cè)手段。同時(shí)，也是測(cè)定患者血清Hs-CRP常用的方法之一。有研究報(bào)道，在血管粥樣硬化進(jìn)展期中，炎癥反應(yīng)起了重要作用，且屬于低度慢性炎癥狀態(tài)，Hs-CRP的檢測(cè)為低度慢性炎癥的發(fā)現(xiàn)提供了重要的研究手段。
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