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五分類血液細(xì)胞分析儀的試劑對(duì)白細(xì)胞分類的三大作用
五分類血液細(xì)胞分析儀的試劑對(duì)白細(xì)胞分類的三大作用
加入時(shí)間：2012-08-20 11:05:06 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：5400
一般對(duì)于血液分析儀這種醫(yī)療器械而言，五分類血液細(xì)胞分析儀的試劑對(duì)白細(xì)胞分類作用最為明顯，具體內(nèi)容如下所示：
五分類血液分析儀所用試劑主要包括溶血素、染液。溶血素主要是嗜酸溶血素和嗜堿溶血素，染液則根據(jù)染色原理及染色目的不同，可分為化學(xué)染色、核酸染色、過(guò)氧化物酶染色等?，F(xiàn)在主要從試劑方面對(duì)血液細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類作用原理以及對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響做以下闡述。
第一、血液分析儀之光學(xué)法+過(guò)氧化物酶染色
用過(guò)氧化物酶染色劑對(duì)WBC進(jìn)行初步區(qū)分，再結(jié)合嗜堿/核通道的差異裂解原理，最終將五種白細(xì)胞準(zhǔn)確區(qū)分開(kāi)來(lái)。過(guò)氧化酶染色技術(shù)主要是利用白細(xì)胞胞漿內(nèi)各成分對(duì)過(guò)氧化物酶活性的差異來(lái)區(qū)分，其中嗜酸性粒細(xì)胞對(duì)過(guò)氧化物酶活性為“++++”，中性粒細(xì)胞對(duì)過(guò)氧化物酶活性為“+++”，單核細(xì)胞對(duì)過(guò)氧化物酶活性為“++”，而淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞與過(guò)氧化物酶不反應(yīng)，這樣通過(guò)染色的方法可將嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞區(qū)分開(kāi)；同時(shí)結(jié)合嗜堿/核通道的差異裂解原理可將嗜堿細(xì)胞和白細(xì)胞總數(shù)檢測(cè)出來(lái)，這樣白細(xì)胞總數(shù)減去嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞即得出淋巴細(xì)胞數(shù)量，最終將五種白細(xì)胞準(zhǔn)確區(qū)分開(kāi)來(lái)。
第二、血液分析儀之光學(xué)法+化學(xué)染色
化學(xué)染色劑對(duì)細(xì)胞脂質(zhì)和蛋白組分進(jìn)行染色，在35度下進(jìn)行孵育，對(duì)單核細(xì)胞的初級(jí)顆粒、嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的特異顆粒進(jìn)行不同程度的染色，同時(shí)對(duì)細(xì)胞的膜（細(xì)胞膜、核膜、顆粒膜）也進(jìn)行不同程度的著色，由于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞對(duì)染色劑的著色程度不同，在激光或氖燈的照射下，激發(fā)出的光強(qiáng)度也不同，每種細(xì)胞特定的細(xì)胞核形態(tài)和顆粒的結(jié)構(gòu)造成光散射的強(qiáng)度不同，因此可以在散點(diǎn)圖中同時(shí)得到嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的結(jié)果。同時(shí)在BASO/WBC檢測(cè)池中，全血樣品與嗜堿溶血素混合，在35度恒溫下，溶解紅細(xì)胞，并使除嗜堿性粒細(xì)胞外的其他白細(xì)胞變成裸核。細(xì)胞通過(guò)鞘流微孔，每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生與細(xì)胞體積成正比例的電子脈沖，繪制出BASO/WBC直方圖，依據(jù)閾值設(shè)定，區(qū)分出白細(xì)胞裸核和嗜堿性粒細(xì)胞，結(jié)合化學(xué)染色對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行四分類，即可完成對(duì)白細(xì)胞的五分類。
第三、血液分析儀之光學(xué)法+核酸染色
1、血液分析儀白細(xì)胞4分類通道
在“DIFF”通道，嗜酸溶血素將紅細(xì)胞與嗜堿性粒細(xì)胞破壞，保留中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，然后核酸染色劑將上述保留細(xì)胞的DNA/RNA染色，由于各類細(xì)胞的核型不同、胞漿內(nèi)DNA、RNA的含量不同、DNA/RNA染色強(qiáng)度不同，因此在分類散點(diǎn)圖所占的位置即不同。利用激光和流式細(xì)胞原理，當(dāng)血細(xì)胞通過(guò)血液分析儀檢測(cè)通道時(shí)，在流式通道內(nèi)，稀釋后的血液從樣本口低速進(jìn)入快速運(yùn)動(dòng)的鞘液流中，因?yàn)橄♂尯蟮难獦雍颓室旱牧魉俨煌?，所以不?huì)混合，形成一個(gè)直徑30微米的液流使血液樣本呈一條細(xì)線穿過(guò)檢測(cè)通道，在激光的照射下激發(fā)出熒光，根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同以及不同角度的散射光繪制成二維散點(diǎn)圖，對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類。散點(diǎn)圖縱座標(biāo)（Y軸）表示側(cè)向熒光強(qiáng)度，反映核酸染料對(duì)DNA/RNA的染色強(qiáng)度，橫座標(biāo)（X軸）表示側(cè)向散射光強(qiáng)度，反映細(xì)胞的內(nèi)容物（核和顆粒）。
2、血液分析儀的白細(xì)胞計(jì)數(shù)和嗜堿性粒細(xì)胞通道
在嗜堿溶血素的作用下,紅細(xì)胞和血小板破碎，除嗜堿性粒細(xì)胞外的其他白細(xì)胞變成裸核。這樣裸核數(shù)量加上嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量即為白細(xì)胞總數(shù)，再根據(jù)激光照射后散射光的不同，區(qū)分出嗜堿細(xì)胞。Y軸表示前向散射光，反映細(xì)胞體積，X軸表示側(cè)向散射光，反映細(xì)胞內(nèi)容物（核和顆粒）。結(jié)合上文4分類通道對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行4分類，即可完成對(duì)WBC總數(shù)計(jì)數(shù)及對(duì)白細(xì)胞的五分類。
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