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酶標(biāo)儀通道差與孔間差檢測(cè)問(wèn)題剖析
酶標(biāo)儀通道差與孔間差檢測(cè)問(wèn)題剖析
加入時(shí)間：2012-08-15 14:42:56 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：5940
酶標(biāo)儀通道差與孔間差檢測(cè)問(wèn)題剖析，具體內(nèi)容如下所示：
一、酶標(biāo)儀通道差檢測(cè)：取一只酶標(biāo)板（酶標(biāo)板是通過(guò)洗板機(jī)來(lái)清洗的，一般是輔助酶標(biāo)儀使用實(shí)現(xiàn)蛋白含量測(cè)定的醫(yī)療器械）小孔杯（杯底須光滑、透明、無(wú)劃痕、無(wú)污染）以酶標(biāo)板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)490nm，參比波長(zhǎng)630或650nm，以下均相同）連續(xù)測(cè)三次，觀察其不同通道之間測(cè)量結(jié)果的一致性可用極差值來(lái)表示其通道差。
為了提高酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度，根據(jù) 96孔酶標(biāo)板的規(guī)格特點(diǎn)，目前大多數(shù)廠家的中、高檔酶標(biāo)儀均采用8通道的檢測(cè)器（部分中、低檔酶標(biāo)儀目前仍采用單通道）。因而它們每個(gè)通道的檢測(cè)能力是不盡相同的，它是儀器內(nèi)部的固有誤差，與所測(cè)溶液濃度成正相關(guān)（不同檢測(cè)器對(duì)不同濃度溶液的響應(yīng)能力不同），所以通道差是衡量酶標(biāo)儀性能良好與否的重要指標(biāo)之一；其衡量指標(biāo)用極差表示，這與廠家推薦的指標(biāo)是一致的；極差值越接近于零，通道差越小，說(shuō)明同一樣品于不同通道檢測(cè)結(jié)果的一致性越好。
二、酶標(biāo)儀孔間差的測(cè)量：選擇同一廠家、同一批號(hào)酶標(biāo)板條（8條共96 孔）分別加入200 ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～ 0.070 A）先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，其誤差大小用±1.96s衡量。
由于不同廠家、不同批號(hào)酶標(biāo)板之間的質(zhì)量差異，導(dǎo)致孔與孔之間的檢測(cè)結(jié)果也不完全一致，這與水平光路光度計(jì)的比色皿質(zhì)量是否符合要求一樣，因此我們認(rèn)為孔間差是酶標(biāo)儀外部的固有誤差，只有準(zhǔn)確測(cè)知孔間差，并對(duì)結(jié)果作出相應(yīng)的校正，才能使檢驗(yàn)結(jié)果更符合實(shí)際情況、更準(zhǔn)確可靠；采用的評(píng)價(jià)指標(biāo)（士1.96 s）也是有利于結(jié)果校正的。另外，在設(shè)計(jì)孔間差測(cè)量的操作方法上，我們將200 ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至 0.065～0.070 A，是充分考慮到加樣器的誤差，其目的是使加樣誤差控制在酶標(biāo)儀的分辨率（0.01 A）以下，這樣也就避免了孔間差結(jié)果不因加樣誤差而導(dǎo)致假性增高。
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