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測(cè)定原理

AC900+三分群血液分析儀采用電阻抗法，檢測(cè)原理是：根據(jù)血細(xì)胞相對(duì)非導(dǎo)電的性質(zhì)，懸浮有電解質(zhì)溶液中的血細(xì)胞顆粒，在通過計(jì)數(shù)小孔時(shí)可引起電阻的變化為基礎(chǔ)，對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和體積測(cè)定。

1、檢測(cè)原理：將等滲電解質(zhì)溶液（被稱為稀釋液,diluents）稀釋的細(xì)胞懸液置入一個(gè)不導(dǎo)電的容器中，將小孔管(也稱傳感器transducer)插到細(xì)胞懸液中。小孔管是電阻抗法細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)重要的組成部分，其內(nèi)側(cè)充滿了稀釋液，并有一個(gè)內(nèi)電極，外側(cè)細(xì)胞懸液中有一個(gè)外電極。檢測(cè)期間，當(dāng)電源接通后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流；稀釋液通過小孔的管壁上固有的小孔（直徑一般<100μm.厚度為75μm左右）向小孔內(nèi)部流動(dòng)。此時(shí)，小孔周圍充滿了具有導(dǎo)電性的液體，其電子脈沖是穩(wěn)定的。如果供給電流I和阻抗R是穩(wěn)定的，根據(jù)歐姆定律通過小孔的電壓V是不變的（這時(shí)V=IR）。當(dāng)有細(xì)胞通過小孔時(shí)，由于細(xì)胞的導(dǎo)電性質(zhì)比稀釋液要低，在電路中小孔感應(yīng)區(qū)內(nèi)的電阻的增加，于是瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)一個(gè)脈沖信號(hào)。電壓增加的變化的程度取決于非傳導(dǎo)的細(xì)胞占據(jù)小孔感應(yīng)區(qū)的體積，即細(xì)胞體積越大，引起的脈沖越高，產(chǎn)生的脈沖振幅越高，測(cè)定脈沖的大小即可測(cè)出細(xì)胞體積大小，記錄脈沖的數(shù)量就可測(cè)定細(xì)胞的數(shù)量。。脈沖信號(hào)經(jīng)過下列步驟，得出細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。

（1）信號(hào)發(fā)生器：通過小孔的各種血細(xì)胞都能產(chǎn)生電阻信號(hào)，信號(hào)電平的高低與細(xì)胞的大小成正比。

（2）放大：由于血細(xì)胞通過微孔時(shí)產(chǎn)生的脈沖訊號(hào)非常微弱，不能直接觸發(fā)計(jì)數(shù)電路，因此必須通過電子放大器，將微伏訊號(hào)放大為伏級(jí)脈沖訊號(hào)。

（3）閾值調(diào)節(jié)：在計(jì)數(shù)不同細(xì)胞時(shí)，應(yīng)調(diào)節(jié)閾值電平，以給出合適的閾值度，使計(jì)數(shù)結(jié)果盡量符合實(shí)際水平。

（4）甄別：通過微孔時(shí)的各種微粒（血細(xì)胞、細(xì)胞碎片、雜質(zhì)等）均可產(chǎn)生相應(yīng)脈沖訊號(hào)，訊號(hào)電平（脈沖幅度）與微粒大小成正比。因除血細(xì)胞外，血中細(xì)胞外，血中細(xì)胞碎片、稀釋液中雜質(zhì)微粒均可產(chǎn)生假訊號(hào)，使計(jì)數(shù)結(jié)果偏高。所謂甄別就是利用甄別器根據(jù)閾值調(diào)節(jié)器提供的參考電平，將低于參考電平的假訊號(hào)去掉，以提高細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。

（5）整形器：經(jīng)過放大和甄別后的細(xì)胞脈沖訊號(hào)波形尚不一致必須經(jīng)過整形器作用，修整為形伏一致標(biāo)準(zhǔn)的平頂波后，才能觸發(fā)電路。

（6）計(jì)數(shù)：血細(xì)胞的脈沖信號(hào)，經(jīng)過放大、甄別、整形后，送入計(jì)數(shù)系統(tǒng)；血液分析儀對(duì)大小不同的脈沖進(jìn)行選擇，區(qū)分出不同類型的細(xì)胞并分別進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2、白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)原理：根據(jù)電阻抗的原理，不同體積的白細(xì)胞通過小孔時(shí)產(chǎn)生的脈沖大小有明顯的差異，依據(jù)這些脈沖的大小，可對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分群。

經(jīng)過溶血?jiǎng)┨幚砗蟮陌准?xì)胞可以根據(jù)體積大小初步確認(rèn)其相應(yīng)的細(xì)胞群：第一群是小細(xì)胞區(qū)(LYMF)，指細(xì)胞體積在35-90fl之間的小細(xì)胞區(qū)，主要分布的是淋巴細(xì)胞；第二群是單個(gè)核細(xì)胞區(qū)，也被稱為中間細(xì)胞（MID），指細(xì)胞體積在90-160fl之間的中間細(xì)胞區(qū)，主要包括單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞，核左移的各階段幼稚細(xì)胞或白血病時(shí)白血細(xì)胞。。第三群是大細(xì)胞區(qū)，主要是中性粒細(xì)胞（GRAN），指細(xì)胞體積在160fl以上的大細(xì)胞區(qū)，主要分布的是中性粒細(xì)胞。儀器根據(jù)各亞群占總體的比例計(jì)算出各亞群的百分率，如果與該標(biāo)本的白細(xì)胞總數(shù)相乘，即得到各類細(xì)胞的絕對(duì)值?？梢钥闯觯娮璺ㄖ皇歉鶕?jù)細(xì)胞體積的大小，將白細(xì)胞分成幾個(gè)群體。

3、紅細(xì)胞數(shù)和血細(xì)胞比容測(cè)定：絕大多數(shù)血液分析儀使用電阻抗法進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞比積測(cè)定，其原理同白細(xì)胞一樣。紅細(xì)胞通過小孔時(shí)，形成的相應(yīng)的脈沖的多少即紅細(xì)胞的數(shù)目，脈沖的高度代表單個(gè)脈沖細(xì)胞的體積。脈沖高度疊加經(jīng)換算即可得到紅細(xì)胞的比容。稀釋的血液進(jìn)入紅細(xì)胞檢測(cè)通道時(shí)，其中含有白細(xì)胞，因此，紅細(xì)胞檢測(cè)的各項(xiàng)參數(shù)均含有白細(xì)胞因素，但正常血液有形成分中白細(xì)胞比例很少約為500：1-700：1，故其影響可忽略不計(jì)，但在病理情況下，如白血病，白細(xì)胞數(shù)明顯增加而又伴嚴(yán)重貧血時(shí)，即可使所得各項(xiàng)參數(shù)產(chǎn)生明顯誤差。血細(xì)胞比容，通常用紅細(xì)胞平均體積（MCV）與紅細(xì)胞相乘得出紅細(xì)胞比積HCT=MCV×RBC。

4、血紅蛋白測(cè)定：當(dāng)稀釋的血液加入溶血?jiǎng)┖?，紅細(xì)胞溶解并釋放血紅蛋白，Hb與溶血?jiǎng)┲械哪承┏煞纸Y(jié)合形成血紅蛋白衍生物，進(jìn)入血紅蛋白測(cè)試系統(tǒng)，在特定波長(zhǎng)（一般在530-550nm）下比色；吸光度的變化與液體中Hb含量成比例，儀器便可顯示HGB濃度。不同系列血液分析儀配套溶血?jiǎng)┡浞讲煌纬傻难t蛋白衍生物亦不同，吸光度各異但最大吸收峰均接近540nm .這是因?yàn)镮CSH推薦的氰化高鐵法，HICN最大吸收峰在540nm。校正儀器必須以HICN值為標(biāo)準(zhǔn)。大多數(shù)系列血液分析儀溶血?jiǎng)﹥?nèi)均含有氰化鉀，與血紅蛋白作用后形成氰化血紅蛋白（注意不是氰化高鐵血紅蛋白），其特點(diǎn)是顯色穩(wěn)定，最大吸收峰接近540nm，但吸收光譜與HICN有明顯的不同。此點(diǎn)在血液分析儀校正時(shí)應(yīng)十分注意。

5、紅細(xì)胞其他參數(shù)的檢測(cè)：　紅細(xì)胞平均值，如紅細(xì)胞平均體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、均是根據(jù)儀器檢測(cè)導(dǎo)出（MCV），或由檢測(cè)的紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量的檢測(cè)數(shù)據(jù)，經(jīng)計(jì)算得到，MCH=HGB÷RBC　MCHC=HGB÷HCT HCT=MCV×RBC。紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW）則是由血液分析儀測(cè)量細(xì)胞體積后獲得的，是反映外周血紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)，即反映紅細(xì)胞大小不等的客觀指標(biāo)。當(dāng)紅細(xì)胞通進(jìn)小孔的一瞬間，計(jì)數(shù)電路得到一個(gè)相應(yīng)的大小的脈沖，脈沖的高度是由細(xì)胞體積大小決定的，不同大小的脈沖的信號(hào)分別貯存在儀器內(nèi)裝計(jì)算機(jī)的不同通道內(nèi)，計(jì)算出相應(yīng)的體積及細(xì)胞數(shù)后，統(tǒng)計(jì)處理而得RDW 值。由于RDW 來自十幾秒內(nèi)近萬個(gè)紅細(xì)胞的檢測(cè)數(shù)據(jù)，不但可以克服測(cè)量紅細(xì)胞直徑時(shí)人為制片因素和主觀因素等影響。

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6、電阻抗法血小板檢測(cè)原理  血小板（platelet, PLT）隨紅細(xì)胞一起在一個(gè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)各種細(xì)胞引起電阻變化，產(chǎn)生的脈沖經(jīng)數(shù)字化后，根據(jù)不同的閾值，計(jì)算機(jī)分別給出血小板和紅細(xì)胞數(shù)目。血小板分別儲(chǔ)存于64個(gè)通道，直方圖范圍在2-28fl，。血小板平均體積（mean platelet volume, MPV）就是PLT體積分布的直方圖的產(chǎn)物。