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單細(xì)胞基因組擴(kuò)增有哪些好處
加入時(shí)間:2016-06-21 11:33:24  當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率:3026

  研究人員通常會(huì)在下游分析中遭遇DNA樣本量有限或不足的問(wèn)題。做為一種增加有限D(zhuǎn)NA量的方法,全基因組擴(kuò)增技術(shù)于1992年出現(xiàn),該方法特別適于法醫(yī)學(xué)鑒定和遺傳疾病的研究,以及如二代測(cè)序技術(shù)和CGH陣列(比較基因組雜交)等新技術(shù)應(yīng)用,后者的主要難題就在于DNA樣本數(shù)量有限,但分析需求量又很可觀。單細(xì)胞基因組擴(kuò)增優(yōu)化了等溫?cái)U(kuò)增的反應(yīng)體系,可實(shí)現(xiàn)微量樣本全基因組無(wú)差別擴(kuò)增。

  使用高度續(xù)進(jìn)性的Phi29聚合酶得到的長(zhǎng)DNA片段確保了Phi29擴(kuò)增得到的DNA覆蓋了整個(gè)基因組,連貫并且無(wú)偏地?cái)U(kuò)增所有遺傳位點(diǎn)。在有偏的研究中,使用MDA、DOP–PCR和PEP技術(shù)對(duì)不同數(shù)量的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增(0.3–300 ng)。使用定量檢測(cè)real-time PCR確定8個(gè)遺傳位點(diǎn)相對(duì)的表達(dá)量。通過(guò)與1 μg未擴(kuò)增的對(duì)照DNA作比較,可以確定遺傳位點(diǎn)的表達(dá)。由于未消除的二級(jí)結(jié)構(gòu)會(huì)導(dǎo)致不同位點(diǎn)的不等同擴(kuò)增,基于PCR的WGA方法(比如DOP–PCR或者PEP)經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致遺傳位點(diǎn)丟失。MDA具有最好的DNA擴(kuò)增覆蓋效果,并且將遺傳位點(diǎn)丟失的風(fēng)險(xiǎn)降到了最低。

  普朗醫(yī)療生產(chǎn)的這款全基因組擴(kuò)增(Whole Genome Amplification)是一種對(duì)全部基因組序列進(jìn)行非選擇性擴(kuò)增的技術(shù),其目的是在沒有序列傾向性的前提下大幅度增加DNA的總量。采用MDA(多重鏈置換擴(kuò)增)的方法,能夠在16個(gè)小時(shí)之內(nèi),將ng甚至是pg級(jí)的微量DNA有效擴(kuò)增至10-40μg高覆蓋度的全基因組DNA。

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  這款全基因組擴(kuò)增試劑盒已經(jīng)把擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行二代測(cè)序,覆蓋度能達(dá)到90%以上,各條染色體基因組的偏差基本一致;同時(shí),我們隨機(jī)選取了10個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增,起始樣本和擴(kuò)增后的樣本均有相應(yīng)的特異性條帶,基本沒有差異。想了解更多的內(nèi)容和資訊的話可以撥打免費(fèi)電話:400-6656-888進(jìn)行咨詢。

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