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普朗醫(yī)療資訊 HLA抗體的臨床檢測方法
普朗醫(yī)療資訊 HLA抗體的臨床檢測方法
加入時間:2012-01-31 09:28:45 當(dāng)前新聞點擊率:5249
普朗醫(yī)療資訊 上面小編已經(jīng)為大家介紹過了HLA抗體的臨床研究意義,接下來,就為大家簡單的闡述一下HLA抗體的檢測方法和應(yīng)用。
HLA抗體的檢測方法
1 微量淋巴細(xì)胞毒實驗(CDC):該實驗是由美國洛杉磯加州大學(xué)的Paul。Terasaki教授于1964年創(chuàng)建。主要原理是淋巴細(xì)胞具有HLA抗原,HLA抗體能結(jié)合到帶有相應(yīng)抗原的淋巴細(xì)胞膜上,補體可以結(jié)合并在淋巴細(xì)胞膜上使其死亡。如果淋巴細(xì)胞不帶有相應(yīng)的抗原,則無此作用。通過染色來觀察細(xì)胞是否死亡來確定相應(yīng)的抗原或抗體。該方法可迅速檢測患者的HLA抗體,但需要分離細(xì)胞,抗原用量大且敏感性不高,多年來在臨床廣泛應(yīng)用。
2 酶聯(lián)免疫法(EL ISA):該實驗的基本原理是將HLA抗原包被在一個孔內(nèi),將患者血清加入孔中與孔內(nèi)的HLA抗原反應(yīng),通過酶作用使其顯色,并利用酶標(biāo)儀進行檢測觀察,用熒光儀根據(jù)吸收光的不同來判斷結(jié)果。這種方法無需分離細(xì)胞,敏感性也有所提高,無需專門儀器設(shè)備,同時可檢出HLA-I類和HLA-II類抗體。但該方法操作繁瑣,也較費時,一次只能檢測一個指標(biāo),因此臨床應(yīng)用受到一定限制。
3 流式細(xì)胞儀法(F lowCy tom e t ry)及單抗原磁珠法(LuminexTMFlow Cytometry):這兩種方法的基本原理都是將HLA單價抗原包被在不同顏色的微磁珠表面,用被檢測血清與磁珠反應(yīng),血清中HLA特異性抗體便與包被在磁珠上的抗原結(jié)合,然后再與標(biāo)記PE的二抗孵育。根據(jù)熒光強弱通過流式細(xì)胞儀檢測出與這些磁珠對應(yīng)的HLA抗體。這兩種方法在酶聯(lián)免疫法的基礎(chǔ)上使敏感性明顯提高,排除其它非反應(yīng)抗原的干擾,可準(zhǔn)確確定HLA抗體的特異性。單抗原磁珠法(L um inexTMF lowCy tom e t ry)在普通流式細(xì)胞儀基礎(chǔ)上進一步改進,并通過分析軟件的更新,對于較弱的反應(yīng)抗體也能準(zhǔn)確檢出。
展 望
HLA抗體與輸血,妊娠,疾病等的相關(guān)性正受到關(guān)注,國內(nèi)HLA抗體檢測越來越多的被應(yīng)用,相信隨著血液分析儀研究的深入,許多未知的問題會得到解決。